Le refuge faunique Marguerite-D’Youville est ouvert à la population sept jours sur sept, du lever au coucher du soleil. Les sentiers sont accessibles aux piétons seulement; les chiens et autres animaux domestiques sont interdits. L’accès se fait par le Pavillon de l’île. Une tarification est en vigueur pour accéder aux sentiers. Le refuge faunique Marguerite-D’Youville est un milieu naturel protégé proposant huit kilomètres de sentiers propices pour la randonnée pédestre ainsi que l’observation et la photographie. Les visiteurs ont la possibilité d’agrémenter leur randonnée à l’aide d’un audioguide relatant des parcelles d’histoire de l’île et proposant de l’information sur la faune et la flore vivant dans le refuge. L’audioguide est offert en location à l’accueil du Pavillon de l’île.

En hiver, les sentiers enneigés deviennent un endroit de prédilection pour les amateurs de raquette et de marche nordique. Un centre de location d’équipement est mis à la disposition des randonneurs. Situé sur l’île Saint-Bernard et constituant plus de 90 % de la superficie du territoire, le refuge faunique est l’un des rares milieux naturels aussi bien protégés à proximité de Montréal. Les marais, les marécages, les rives, les prairies, l’érablière à caryers et la chênaie à chênes bicolores qu’on y retrouve constituent des écosystèmes exceptionnels. Des espèces fauniques et floristiques des plus diversifiées s’y abritent. Au cours des dernières années, on y a observé plusieurs espèces floristiques rares et 231 espèces d’oiseaux. Le refuge faunique offre également un habitat remarquable pour la sauvagine et le poisson, en partie grâce à d’importants aménagements fauniques. Enfin, on ne pourrait passer sous silence la grande valeur patrimoniale de l’île, marquée par la présence d’artéfacts archéologiques.